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  • 丙酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測試劑盒 微量法
產品名稱:

丙酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測試劑盒 微量法

產品品牌: 索萊寶 價格:
廠商性質: 生產廠家 產品時間: 2020-08-06
丙酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測試劑盒 微量法測定意義:PDH是丙酮酸脫氫酶復合體(PDHC)催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶,催化丙酮酸脫梭生成羥乙基-TPP,把糖酵解和三羧酸循環連接起來。

產品概述

品牌SOLARBIO/索萊寶貨號BC0385
規格100管/96樣供貨周期現貨
主要用途丙酮酸脫氫酶活性測定應用領域醫療衛生,化工,生物產業,石油

丙酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測試劑盒 微量法

貨號:BC0385

規格:100T/96S

 

產品內容:

試劑一:110mL×1瓶,4℃保存;

試劑二:1mL×1支,-20℃避光保存;

試劑三:液體20mL×1瓶,4℃保存;

試劑四:粉劑×1支,4℃保存;

試劑五:粉劑×1支,-20℃保存;

試劑六:粉劑×1支,4℃保存;臨用前加入1mL蒸餾水;

試劑七:粉劑×1支,4℃保存;

工作液的配制:臨用前把試劑四、五、0.5mL六、七轉移到試劑三中混合溶解待用。

 

產品說明:

     PDH(EC 4.1.1.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是丙酮酸脫氫酶復合體(PDHC)催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶,催化丙酮酸脫梭生成羥乙基-TPP,把糖酵解和三羧酸循環連接起來。

    PDH催化丙酮酸脫氫,同時還原2,6-二氯酚靛酚(2,6-DCPIP),從而導致605nm光吸收的減少。

 

需自備的儀器和用品

    可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

 

操作步驟:

一、PDH的提取

    準確稱取0.1g組織或收集500萬細胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑二,用冰浴勻漿器或研缽勻漿充分研磨,4 ℃ 11000 g離心10min,取上清,置冰上待測。

二、測定步驟

  • 分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長605nm,蒸餾水調零。
  • 每個樣本需要180μL工作液,按樣本數取出一定量的工作液置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min。
  • 空白管:在微量比色皿或96孔板中加入180μL工作液和10μL水,混勻,立即記錄605nm處初始吸光值A1和 1min后的吸光值A2,計算ΔA空白=A1-A2。
  • 測定管:在微量比色皿或96孔板中加入180μL工作液和10μL樣本,混勻,立即記錄605nm處初始吸光值A3和 1min后的吸光值A4,計算ΔA測定=A3-A4。
  •  

三、PDH活性計算

a.用微量比色皿測定的計算公式如下

(1) 按樣本蛋白濃度計算

單位的定義:每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

PDH活性(U/mg prot)=[(ΔA測定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反總×109]÷(Cpr×V樣) ÷T

=904.762×(ΔA測定-ΔA空白)÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計算

單位的定義:每g組織在反應體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

PDH活性(U/g 鮮重)=[(ΔA測定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反總×109]÷(V樣÷V樣總×W) ÷T=913.81×(ΔA測定-ΔA空白)÷W

(3) 按細菌或細胞密度計算

單位的定義:每1萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

PDH活性(U/104 cell)=[(ΔA測定-ΔA空白)×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣÷V樣總×500)÷T=1.828×(ΔA測定-ΔA空白)

V反總:反應體系總體積,1.9×10-4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數,2.1×104L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入試劑一和試劑二體積,1.01 mL;T:反應時間,1 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣品質量,g;500:細菌或細胞總數,500萬。

 

b.96孔板測定的計算公式如下

(1) 按樣本蛋白濃度計算

單位的定義:每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

PDH活性(U/mg prot)=[(ΔA測定-ΔA空白)×V反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V樣) ÷T

=1809.524×(ΔA測定-ΔA空白)÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計算

單位的定義:每g組織在反應體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

PDH活性(U/g 鮮重)=[(ΔA測定-ΔA空白)×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣÷V樣總×W) ÷T=1827.62×(ΔA測定-ΔA空白)÷W

(3) 按細菌或細胞密度計算

單位的定義:每1萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

PDH活性(U/104 cell)=[(ΔA測定-ΔA空白)×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣÷V樣總×500) ÷T=3.655×(ΔA測定-ΔA空白)

V反總:反應體系總體積,1.9×10-4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數,21×103mol/L/cm;d:96孔板光徑,0.5cm;V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入試劑一和試劑二體積,1.01 mL;T:反應時間,1 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣品質量,g;500:細菌或細胞總數,500萬。

 

注意事項

1、測定過程中所有樣本在冰上放置,以免變性和失活。

2、測定管的ΔA值在0.01-0.25之間,若測定管的ΔA值大于0.25,需將樣本進行稀釋。

相關文獻:

 《Rare ginsenosides ameliorate lipid overload-induced myocardial insulin resistance via modulating metabolic flexibility.》 作者:Shuang Peng,Yilei Wang,Ying Zhou,Tingting Ma,Yapu Wang,Jia Li,Fang Huang,Junping Kou,Lianwen Qi,Baolin Liu,Kang Liu 期刊:Phytomedicine 影響因子:4.18 PMID:31005715

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運輸說明:

極低溫產品:極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產品的性質穩定如一,為您的實驗保駕護航。
低溫產品:低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來,再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴實密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產品的性質穩定如一,為您的實驗保駕護航。
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